实验研究
CRELD1基因表达量对心内膜垫发育中相关基因的影响
中华实用儿科临床杂志, 2017,32(13) : 1013-1017. DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-428X.2017.13.014
摘要
目的

探讨CRELD1基因表达量的改变对心内膜垫发育中相关基因的影响。

方法

通过慢病毒载体的构建实现CRELD1基因的过表达及沉默,然后用慢病毒载体感染人胚胎肺成纤维细胞(HFL-I),实验分为5组:空白对照组、干扰阴性对照(NC)组、干扰组、过表达NC组及过表达组。感染成功后,分别用实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blot检测CRELD1Sox9AggrecanScleraxisTenascin-C的mRNA和蛋白表达。

结果

通过测序表明干扰载体pLV3-shRNA-CRELD1和过表达载体pLV4-CRELD1构建成功。感染慢病毒的HFL-I在荧光倒置显微镜下观察,满视野呈现明显的绿色荧光,表明感染成功。qPCR和Western blot的检测结果一致:Sox9Aggrecan的表达量在干扰组明显高于干扰NC组,在过表达组低于过表达NC组。而Scleraxis干扰组和过表达组均高于各自的NC组。Tenascin-C的表达量在干扰组明显低于干扰NC组,在过表达组高于过表达NC组。

结论

CRELD1基因对心内膜垫发育中的相关基因Sox9Aggrecan的表达量有负调节作用,对Tenascin-C的表达量有正调节作用。这对于阐明其在房室间隔缺损中的作用提供一定的理论基础。

引用本文: 陈璇, 秦玉明, 沈捷. CRELD1基因表达量对心内膜垫发育中相关基因的影响 [J]. 中华实用儿科临床杂志,2017,32( 13 ): 1013-1017. DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-428X.2017.13.014
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心内膜垫的发育是整个心脏发育的关键部分,其不仅参与瓣膜的形成,对心脏腔室间的隔膜也有作用。其发育经一系列复杂的信号通路调节[1,2],其中BMP-Sox9-Aggrecan和FGF-Scleraxis-Tenascin-C信号通路已研究较多[3,4,5,6],证明在心内膜垫的形成,延伸和塑性中发挥重要作用。心内膜垫的发育异常导致心内膜垫缺损。CRELD1基因是第1个被发现的与心内膜垫缺损的相关基因。本研究目的是检测CRELD1基因表达量变化时,心内膜垫发育中的相关转录因子Sox9Scleraxis及其相应的下游基因AggrecanTenascin-C表达量的变化,了解CRELD1基因在心内膜垫发育中的调节通路,为阐明其在心内膜垫缺损发生发展过程中的作用提供依据。

 
 
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关键词
心内膜垫
干扰
CRELD1基因
过表达